水树晃一（伊东健人 配音）是公认的大高个，180cm的身高让他无论身处何地都是最显眼的那一个。一次偶然之中，晃一竟然被名为凯乌斯（小野友树 配音）的男子召唤到了巨人国之中，身高250cm的凯乌斯一见到晃一就发出暴言，希望晃一能够成为他的新娘，并且为他繁衍子嗣。就这样，晃一在巨人国里开始了他的新生活。 美蒂娜（藤本教子 配音）是凯乌斯原定的未婚妻，哪知道被半路杀出的晃一给抢了王后的位置，因此对晃一总是充满了敌意。巨人国并未一直处于和平状态，隔壁兽人国的巴罗（中泽匡智 配音）和贝利（白井悠介 配音）一直虎视眈眈。
自称有着大众脸的高中生一条乐（内山昂辉 配音），其实是著名流氓帮派“集英组”头目的独子，他本想过上平凡人的生活，直到一个美少女转校生桐崎千棘（东山奈央 配音）的出现，他们的命运自此向不可预料的方向发展。 这位金发碧眼的混血儿转校生，原来是美国黑帮“蜂巢”老大的千金，为了双方家族能和睦相处，一条乐和千棘必须假装成一对恋人。个性不合的二人，心不甘情不愿地开始了他们的“甜蜜”生活。在打打闹闹的交往中，千棘渐渐喜欢上了一条乐，而一条乐却一直暗恋着同班女生小野寺（花泽香菜 配音），但因为各种原因无法与之心意相通。这对校园三角恋，因为黑帮和警察的介入，越发不受控制……
西村英骑（丰永利行 配音）是一名热爱网络游戏的少年，在电子信息构筑的虚幻世界之中，他信奉着“防守就是最有利的攻击”这一信条。曾经，西村在网络世界中有着一段无疾而终的恋情，他喜欢上的女孩，其在现实中的身份竟然是中年欧吉桑。经此一役，大受刺激的西村发誓再也不在网络中相信任何人。 某日，网络中一位名叫亚子（日高里菜 配音）的玩家向西村告白，尽管西村接受了她的表白并且在游戏中举行了婚礼，但内心里始终对对方持有着怀疑的态度。之后，工会举行的线下聚会，让西村没有想到的是，不仅亚子是真真正正的女孩子，就连另外两名玩家濑川茜（水濑祈 配音）和御圣院杏（市道真央 配音）亦是如假包换的女孩子。
小猪佩奇是一个可爱的但是有些小专横的小猪。她已经五岁了，与她的猪妈妈，猪爸爸，和弟弟乔治生活在一起。佩奇最喜欢做的事情是玩游戏，打扮的漂漂亮亮，渡假，以及在小泥坑里快乐的跳上跳下和与苏西羊（她最好的朋友）乔治（她的弟弟）一起玩儿，拜访她的猪爷爷，猪奶奶。
故事以TV版为基础，战斗所剩下的骑士只有六人：城户真司(龙骑)、秋山莲(夜骑)、北冈秀一(钢兵),浅仓威(王蛇),雾岛美穗(FEMME)和神秘的龙牙RYUGA。雾岛美穗成为 骑士的目的是要杀死浅仓为姊姊报仇，并令姊姊复活。而北冈正是帮浅仓脱去杀人罪的律师，他因内疚而多次帮助美穗，可惜美穗并不接受，令他意兴阑珊的退出 骑士之间的战斗。为了报仇的美穗不理真司的阻止，仍多次与浅仓战斗，却反而令自己陷入危机，当浅仓向美穗下毒手时，龙牙突然出现解救美穗，并以强大的力量将王蛇压倒 ，令美穗成功杀死浅仓。由於美穗以为是真司救了她，便相约他出来吃东西希望报答他，而真司和美穗的感情亦得以发展，可惜这个美好时刻却被邪恶的 龙牙破坏。镜世界中的真司(RYUGA)假冒真正的真司袭击美穗，美穗於是与龙牙战斗但不敌，虽然美穗被真司所救，但最後因伤重而死…。 另一方面取回小时候的记忆的优衣，知道神崎士郎发动战斗的目的是为了自己(详情请看TV版剧情简介的部份)，於是她决定以自杀来阻止神崎士郎的疯狂行为 。另外真司亦知道自己是小时候间接害死优衣的人，令他感到非常内疚。此时镜世界中的真司出现，并欺骗真司说和他合体可拯救优衣，合体後的龇牙以最强Rider的身份向 放夜骑作出挑战。 得悉优衣已死的神崎士郎受不了打击，在痛哭嚎叫下消失了，镜世界中的成千上万蜻蜓怪因而失控，飞到现实世界袭击人类。战斗中的夜骑与龙牙终於发现优衣的屍体 ，在这个冲击下真司竟从龙牙的身体中分裂出来，并和龙牙作宿命决战。 最後真司和莲变身成SURVIVE形态，骑著契约兽飞向成千上万的蜻蜓怪，与它们作最後决战，走向未知的未来…。
【《真·一骑当千》动画化决定】《#一骑当千# 》的续作，《真·一骑当千》宣布2022年动画化决定。 《一骑当千》系列曾在2003年被改编为电视动画；第二季《一骑当千Dragon Destiny》于2007年2月播出；第三季《一骑当千Great Guardians》于2008年6月播出；第四季《一骑当千XTREME XECUTOR》于2010年3月播出，此外还有两季OVA。
